AS ENZIMAS
I ) Endonucleases de restrição
Enzimas com actividade nuclease, ou seja, enzimas que cortam as ligações fosfodiésteres.
Existem dois tipos:
- Exonucleases – corte ao nível das extremidades
- Endonucleases – corte interno
Existem 3 tipos de classes de endonucleases de restrição (ER):
1) Reconhecem sequências específicas mas cortam aleatoriamente e à distância. São dependentes de ATP.
2) Reconhecem sequências específicas mas cortam aleatoriamente e proximamente. São dependentes de ATP.
3)Reconhecem sequências específicas e cortam num sítio específico dessa sequência. Não são dependentes de ATP. As sequências que reconhecem têm em média 4-8pb.
As ER do tipo 3, mais comuns e mais utilizadas, têm 3 características principais:
- especificidade ao nível do substrato – DNA de cadeia dupla
- especificidade ao nível da localização do corte – cortam apenas quando reconhecem uma sequência específica
- especificidade ao nível do tipo de corte – dentro da sequência que reconhecem têm um sítio específico de corte.
Existem 3 tipos de corte:
1)Extremidades coesivas
Exemplo: EcoRI
5’ – G AATTC – 3’
3’ – CTTAA G – 5’
ou
Exemplo: PstI
5’ – CTGCA G – 3’
3’ – G ACGTC – 5’
2) Extremidades não coesivas ou cegas
Exemplo: EcoRV
5’ – GAT ATC – 3’
3’ – CTA TAG – 5’
II) Fosfatases e cinases
Fosfatases – eliminam um grupo fosfato
Cinases – adicionam um grupo fosfato que vão buscar ao ATP
II) Polimerases
1) DNA polimerase I
Actividade polimerase 5’ -> 3’ – principal actividade
Actividade exonuclease 5’ -> 3’ – Reparação
Actividade exonuclease 3’ -> 5’ – Proofreading
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