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AS ENZIMAS

I ) Endonucleases de restrição

Enzimas com actividade nuclease, ou seja, enzimas que cortam as ligações fosfodiésteres.

Existem dois tipos:

-         Exonucleases – corte ao nível das extremidades

-         Endonucleases – corte interno

Existem 3 tipos de classes de endonucleases de restrição (ER):

1) Reconhecem sequências específicas mas cortam aleatoriamente e à distância. São dependentes de ATP.

2) Reconhecem sequências específicas mas cortam aleatoriamente e proximamente. São dependentes de ATP.

3)Reconhecem sequências específicas e cortam num sítio específico dessa sequência. Não são dependentes de ATP. As sequências que reconhecem têm em média 4-8pb.

As ER do tipo 3, mais comuns e mais utilizadas, têm 3 características principais:

-       especificidade ao nível do substrato – DNA de cadeia dupla

-       especificidade ao nível da localização do corte – cortam apenas quando reconhecem uma sequência específica

-       especificidade ao nível do tipo de corte – dentro da sequência que reconhecem têm um sítio específico de corte.

Existem 3 tipos de corte:

1)Extremidades coesivas

Exemplo: EcoRI

5’ – G       AATTC – 3’

3’ – CTTAA       G – 5’

ou

Exemplo: PstI

5’ – CTGCA        G – 3’

3’ – G        ACGTC – 5’

2) Extremidades não coesivas ou cegas

Exemplo: EcoRV

5’ – GAT       ATC – 3’

3’ – CTA       TAG – 5’

II) Fosfatases e cinases

Fosfatases – eliminam um grupo fosfato

Cinases – adicionam um grupo fosfato que vão buscar ao ATP

II) Polimerases

1) DNA polimerase I

Actividade polimerase 5’ -> 3’ – principal actividade

Actividade exonuclease 5’ -> 3’ – Reparação

Actividade exonuclease 3’ -> 5’ – Proofreading